Diabetologia：应答但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肝细胞自身抗锥体到显现1型号冠心病诊疗病征的的工业发展率在儿童时期就有很好的揭示，多个肝细胞自身抗锥体阴性的儿童里有70%在抗体转换后10年中患上冠心病，而随访15年的儿童这一%-减小到84%。来得之下，占诊疗1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的复发机制还不能得到充分的研究课题。

越来越多的人开始可用分期系统来定义1型号冠心病的的工业发展：个锥体在显现多种肝细胞自身抗锥体时转入第1阶段，显现血糖异常时转入第2阶段，显现病征时转入第3阶段。一些多发肝细胞自身抗锥体阴性的个锥体，在1期和2期，的工业发展较慢，并工业发展为复发的1型号冠心病。我们之后揭示了一两组在首次监测到多种肝细胞自身抗锥体取样后至少10年无冠心病的极慢的工业发展者，这两组患儿多人少，但特征非常明确。随后，我们发现肝细胞自身免疫选择性CD8+T巨噬细胞反应在的工业发展极快的患儿里基本不存在，但在近期复发和值得注意的冠心病患儿里很容易监测到。这也许证明，与的工业发展患儿来得，这些患儿自身免疫反应的恒定增强。

早期研究课题证明，尽管恒定性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但冠心病患儿存在一些基本功能局限性，其里包含对IL-2的反应能力减小。此外，冠心病患儿里的振荡CD4+T巨噬细胞也许对恒定更加具抵抗性，观感为振荡T巨噬细胞的可抑制减慢，自然转化成的Treg和锥肾脏转化成的其会Treg，以及免疫经历的CD4+T巨噬细胞里IL-2反应减慢。本研究课题的目的是揭示了CD4+恒定性T巨噬细胞(Treg)在一小群极极快的工业发展者里的特征，他们的总多人为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁以下发病的患儿亲属里检查1型号冠心病的危险状况。我们之后揭示了长期极快的工业发展者的特征，他们保持多重肝细胞自身抗锥体阴性将近10年，但不能显现冠心病的诊疗病征，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名之前保持无冠心病并不想给予大量血液取样的极快的工业发展者纳入T和B巨噬细胞基本功能研究。在现今的研究课题里，8名慢的工业发展者(SP两组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的肝细胞自身抗锥体阴性。所有的参与者都正处于1型号冠心病的工业发展的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗锥体对某些免疫的阴性反应，然而，一名患儿已经正处于2期至少6年，但不能显现诊疗病征，一名患儿被诊断为冠心病，该受试者72岁，在搜集实验取样时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据研究里对该供锥体开展了除此以外验。分离外周血单个质姪巨噬细胞(PBMCs)，改用多参数流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞可抑制检验验供锥体里Treg的阈值、表现型号和基本功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无全权负责聚类研究，验Treg表现型号。

结果：与健康供锥体来得，来自慢的工业发展锥体的梦境CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类揭示，诱导的梦境CD4+ Treg阈值减小，与糖皮质激素其会的TNFR具体蛋白(GITR)表述减小有关。一名HbA1c下降的患儿与的工业发展极快者和匹配的对照两组来得，Treg对光不尽相同。基本功能研究证明，与健康供锥体来得，来自极快的工业发展锥体的Treg介导的CD4+振荡T巨噬细胞可抑制明显受损。观感为对振荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的可抑制减小。

由此可知1 深入的表现型号研究揭示，CD4+Treg亚型号在慢的工业发展路由表里减小。由FlowSOM生成的Treg房，聚集在来自所有供锥体的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物表述鉴定出新10个元簇:梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)可用9个不同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个节点代表者一个一个大(100个一个大)，更加大的元一个大(10个元一个大)在节点两组区域内上色。每个节点里的饼由此可知回应单个上面的表述级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以揭示整锥体上面表述。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成由此可知，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对丰度为每个metacluster装入新线由此可知(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T巨噬细胞(l)。红色边框代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 可用CITRUS的预测模型号证实，Treg阈值的减小是的工业发展极快的标志。分级门控(a - f)和水果研究(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的代表者性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述开展分离，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(横纹)和SP(蓝点)两组以及供锥体SP 606(红色)里CD25+ cd127的阈值汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控空集的装入新线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)甜菜簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突出新的簇被辨别为SP和HD路由表彼此之间的不同。(j)装入新线由此可知揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对丰度(%-)。(k)平方和揭示每个簇的表现型号(黑色)和Treg上面相对表述与背景表述(黄色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇里上面的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩验

由此可知3 与健康献血者来得，的工业发展极快者梦境treg的GITR减小。每个梦境CD4+T巨噬细胞元簇(梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表述上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表述热由此可知(sp606不包含在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表述结合，揭示平方和(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon选取符号秩和验，p< 0.07(红色)所有供锥体包含，p< 0.05(黄色)供锥体SP 606和匹配的HD不包含在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表述，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)结合，揭示平方和(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩验

由此可知4 来自极快的工业发展的CD4+ treg巨噬细胞控制振荡CD4+T巨噬细胞的能力减小。SP两组用黄色的新线和边框回应，HD两组用灰色的新线和边框回应，红色的新线/边框回应供锥体sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(此番者)被上面为CFSE, Treg按捕捉到的%-反应物。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，培养3天后开展流式巨噬细胞奥义监测。(a-d)与CD4+此番者相对应的treg培养(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比率。可用阴性对照(诱导的响应巨噬细胞分别为treg)计算可抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 振荡CD4+T巨噬细胞对极快的工业发展的T巨噬细胞诱导的可抑制更加敏感。SP两组用黄色的新线和边框回应，HD两组用灰色的新线和边框回应，红色的新线/边框回应供锥体sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel上面，treg按捕捉到的%-反应物。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，培养3天后开展流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬细胞因姪研究。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制前年(b)。(c,d) CD25可抑制前年(c)和CD134可抑制前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养里的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得出新的假设是，来自极快的工业发展姪的诱导梦境CD4+Treg在GITR表述里得到了扩大和比较丰富，重申了进一步研究课题Treg在1型号冠心病风险个锥体里的异质性的实质。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28