Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型冠心病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来去甲自身病原体到显现出来1M-肝炎药理学病症的十分困难率在孩童时期就有很好的描述，多个去甲自身病原体乙型肝炎的孩童当中有70%在血清转换后10年内中风肝炎，而随访15年的孩童这一比例增高到84%。比起之下，分之二药理学1M-肝炎一半以上的M-1M-肝炎的中风机制还从未获取充分的研究成果。

越来越多的人开始用作分期系统来定义1M-肝炎的十分困难：社会阶层在显现出来多种去甲自身病原体时进入第1下一阶段，显现出来血糖异常时进入第2下一阶段，显现出来病症时进入第3下一阶段。一些多发去甲自身病原体乙型肝炎的社会阶层，在1期和2期，十分困难较快，并演进为中风的1M-肝炎。我们之前描述了一三组在首次检查和到多种去甲自身病原体样品后至寡10年无肝炎的亦非快十分困难者，这三组病患者数目寡，但构造颇为明确。随后，我们发掘出去甲自身上皮酶特异性CD8+T酶反不宜在十分困难亦非快的病患者当中基本不存在，但在近期中风和则有的肝炎病患者当中很容易检查和到。这可能表明，与十分困难病患者比起，这些病患者诱发反不宜的调节增强。

20世纪研究成果表明，尽管调节性T酶(Treg)数量正常，但肝炎病患者存在一些功用缺陷，其当中包括对IL-2的反不宜技能降低。此外，肝炎病患者当中的效不宜CD4+T酶可能对调节不具抵抗性，表现为效不宜T酶的抑止减弱，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及上皮酶经历的CD4+T酶当中IL-2反不宜减弱。本研究成果的目的是描述了CD4+调节性T酶(Treg)在这群人亦非亦非快十分困难者当中的构造，他们的平均年龄三组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁所列确诊的病患者亲属当中检查1M-肝炎的危险因素。我们之前描述了仍然亦非快十分困难者的构造，他们保持多重去甲自身病原体乙型肝炎超过10年，但从未显现出来肝炎的药理学病症，快性或非顺利完成性诱发。随后，10名再次保持无肝炎并情愿提供大量体内样品的亦非快十分困难者划定T和B酶功用比对。在目前的研究成果当中，8名快十分困难者(SP三组)，当中位年龄三组43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的去甲自身病原体乙型肝炎。所有的举例来说都处于1M-肝炎十分困难的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身病原体对某些上皮酶的乙型肝炎反不宜，然而，一名病患者已经处于2期至寡6年，但从未显现出来药理学病症，一名病患者被诊断为肝炎，该受试者72岁，在挖掘实验样品时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据比对当中对该NADP顺利完成了实质上评估。分离外周血单个核酶(PBMCs)，采用多参数流式酶奥义和T酶抑止试验评估NADP当中Treg的频率、表M-和功用。用作FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)顺利完成无监督聚类比对，评估Treg表M-。

结果：与健康NADP比起，来自快十分困难体的遗忘CD4+T酶的监督聚类标示出，激活的遗忘CD4+ Treg频率增高，与阿托品诱导的TNFR特别酶(GITR)表述增高有关。一名HbA1c消退的病患者与十分困难亦非快者和意味着的小鼠比起，Treg谱有所有所不同。功用比对表明，与健康NADP比起，来自亦非快十分困难体的Treg介导的CD4+效不宜T酶抑止明显受损。表现为对效不宜CD4+T酶CD25和CD134表述的抑止增高。

上图1 透彻的表M-比对标示出，CD4+Treg非典M-在快十分困难配置文件当中增高。由FlowSOM分解成的Treg二楼，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -酶上。根据上标物表述确认出10个元簇:遗忘T酶_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T酶;HLA-DR + GITR +遗忘T酶;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用作9个有所不同Treg上标分解成的10个元簇的MST。每个键值代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在键值三组周围打磨。每个键值当中的饼上图回应单个上标的表述级别。(b)每个元聚类的热上图，以标示出整体上标表述。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)分解成上图，以及FlowSOM定位的每个元簇的裂口。(e-l)一般来说重元素为每个metacluster盒直通上图(重元素> 0.05%)已确定为HD和SP三组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T酶(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T酶(l)。橘色带子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检查和。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用作CITRUS的预测模M-证实，Treg频率的增高是十分困难亦非快的标志。分级门控(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP举例来说和意味着的HD举例来说在CD4+CD45RA−T酶上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的传奇色彩上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利完成分离，虚拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(白斑)三组以及NADPSP 606(橘色)当中CD25+ cd127的频率摘要上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的盒直通上图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突出的簇被定位为SP和HD配置文件间的有所不同。(j)盒直通上图标示出了在SP(白斑)和HD(灰点)三组当中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的一般来说重元素(比例)。(k)上图表标示出每个簇的表M-(粉红色)和Treg上标一般来说表述与取材表述(红色);上列，磁盘Treg_3;一个大一行，磁盘Treg_4。取材与所有其他簇当中上标的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检查和

上图3 与健康献血者比起，十分困难亦非快者遗忘treg的GITR增高。每个遗忘CD4+T酶元簇(遗忘T酶_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T酶;HLA-DR + GITR +遗忘T酶;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查和每个表述上标的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表述热上图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表述串联，标示出上图表(c)和摘要上图(d)。Wilcoxon配对下标秩和检查和，p< 0.07(橘色)所有NADP包括，p< 0.05(红色)NADPSP 606和意味着的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表述，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)串联，标示出上图表(e)和摘要上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检查和

上图4 来自亦非快十分困难的CD4+ treg酶压制效不宜CD4+T酶的技能降低。SP三组用红色的直通和带子回应，HD三组用粉红色的直通和带子回应，橘色的直通/带子回应NADPsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T酶顺利完成分选。CD4+CD25−(不宜答者)被上标为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠转化酶，指导3天后顺利完成流式酶奥义检查和。(a-d)与CD4+不宜答者一般来说不宜的treg指导(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不宜答者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比率。用作乙型肝炎对照(激活的响不宜酶内含treg)计算抑止比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 效不宜CD4+T酶对亦非快十分困难的T酶转化的抑止更敏感。SP三组用红色的直通和带子回应，HD三组用粉红色的直通和带子回应，橘色的直通/带子回应NADPsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T酶顺利完成分选。CD4+CD25−(不宜答者)被cfsel上标，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠转化酶，指导3天后顺利完成流式酶奥义(CD25反染)和酶因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606不宜答者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止比率(b)。(c,d) CD25抑止比率(c)和CD134抑止比率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导当中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自亦非快十分困难子的转化遗忘CD4+Treg在GITR表述当中获取了扩展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1M-肝炎风险社会阶层当中的系统性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28